訂購信息：
| 目錄號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
| X10013 | Phleomycin 腐草霉素（20mg/ml） | 1ml |
| X13147 | Phleomycin 腐草霉素（20mg/ml） | 5*1ml |
| X13053 | Phleomycin 腐草霉素粉末 | 250mg |
產(chǎn)品說明：
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CAS號 |
11006-33-0 |
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分子式 |
C55H85O21N20S2Cu?HCl |
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分子量 |
1525g/mol |
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純度 |
>90%（HPLC） |
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內(nèi)毒素含量 |
＜1EU/mg |
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外觀 |
藍(lán)色溶液 |
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運(yùn)輸 |
冰袋運(yùn)輸 |
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保存 |
4℃或-20℃保存。4℃有效期12個月，-20℃有效期18個月。避免反復(fù)凍融。 |
使用說明：
溫馨提示：
1）細(xì)胞對腐草霉素的敏感性受pH值影響，如pH值越高，敏感性越高；另外，對于高滲透壓培養(yǎng)基如原生質(zhì)體再生用的培養(yǎng)基，腐草霉素的活性會明顯降低2-3倍。因此也可能通過使用低鹽培養(yǎng)基來降低腐草霉素使用量。
2）使用前，需將低溫存放的腐草霉素置于室溫回溫，之后低速充分混勻。
操作步驟
1. 大腸桿菌
攜帶bleomycin抗性基因如Sh ble，Tn5的質(zhì)粒，一旦轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌受體菌如HB101，DH5a，MC1061，賦予其腐草霉素抗性。
腐草霉素抗性的轉(zhuǎn)化子可以在添加5 μg/mL Phleomycin的低鹽LB瓊脂培養(yǎng)基（Yeast extract 5 g/L，Tryptone 10 g/L，NaCl 5 g/L，Agar 15 g/L，pH 7.5）中進(jìn)行篩選。加有腐草霉素的平板可于4℃穩(wěn)定保存1個月。
2. 酵母菌
釀酒酵母的腐草霉素抗性轉(zhuǎn)化子可在添加10 μg/mL Phleomycin的YEPD培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選。
實驗步驟：按常規(guī)方法進(jìn)行酵母細(xì)胞轉(zhuǎn)化，一旦DNA進(jìn)入細(xì)胞后，用YEPD培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞并置于搖床上培養(yǎng)6 h或過夜，使其抗性性狀得以表達(dá)。之后將細(xì)胞冰浴1 h并涂布培養(yǎng)在添加10 μg/mL Phleomycin的YEPD（pH 7.0）固體培養(yǎng)基上。
3. 真菌
根據(jù)轉(zhuǎn)化子對Phleomycin 的敏感性不同，在添加有10-50 μg/mL腐草霉素的再生培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行篩選。先將細(xì)胞在4℃孵育過夜然后置于生長溫度培養(yǎng)，可提高其對抗生素的敏感性。
4. 植物細(xì)胞
根據(jù)植物類型不同，選擇5-25 μg/mL Phleomycin進(jìn)行轉(zhuǎn)化子篩選。
5. 哺乳動物細(xì)胞
5-50 μg/mL Phleomycin，推薦先通過建立滅殺曲線來確定最佳濃度。與G418做比較，可能需要更長的時間來殺死細(xì)胞或者使細(xì)胞從平板上脫落，尤其當(dāng)細(xì)胞處于高密度的情況。
依細(xì)胞系不同，通常需要5~21天來挑選具腐草霉素抗性的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
注意事項：
1. 腐草霉素對濃酸較為敏感，但可短時間暴露于稀酸中。使用前將本品回溫至室溫，并輕輕混勻。
2. 腐草霉素有毒，避免直接接觸皮膚，不可吞服。酸性或堿性pH，或次磷酸鈉中會即刻失效。
3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。
