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參數(shù)說明：

使用說明：

1、用途及使用方法

1）用途：IPTG是β–半乳糖苷酶的活性誘導物質?；谶@個特性，當pUC系列的載體DNA（或其他帶有lacZ 基因載體DNA）以lacZ 缺失細胞為宿主進行轉化時、或用M13噬菌體的載體DNA進行轉染時，如果在平板培養(yǎng)基中加入X–gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互補性，可以根據(jù)是否呈現(xiàn)白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑選出基因重組體。此外，它還可以作為具有lac或tac等啟動子的表達載體的表達誘導物使用。

2）使用方法：首先把IPTG配制成23.83 mg/ml（100 mM）的水溶液，并進行過濾除菌后保存。然后在100 ml的瓊脂培養(yǎng)基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal（20 mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100 μl的Amp（100 mg/ml），制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養(yǎng)基。

當DNA片段插入至pUC系列載體（或其他帶有l(wèi)acZ、Amp基因載體），然后轉化至lacZ缺失細胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養(yǎng)基，可根據(jù)長出菌體的藍白色，而方便地挑選出基因重組體（白色為具有DNA插入片段的基因重組體）。

2 、儲存液配制

1）稱取2.383 g IPTG；加入10 mL去離子水充分溶解IPTG粉末，配制1 M的儲存液；

2）用5-10 mL去離子水潤濕0.22 μm針孔過濾；

3）0.22 μm濾膜除菌上述IPTG溶液。分裝成1 mL，-20℃凍存，有效期可達1年。

3、藍白斑篩選

1. X-Gal、IPTG 加入瓊脂培養(yǎng)基溶液

1）高壓滅菌已加瓊脂的培養(yǎng)基，并冷卻到50℃左右。

2）每毫升培養(yǎng)基內加入10 μL 20 mg/mL X-gal 溶液、10 μL 0.1 M的IPTG（使其終濃度達到1 mM）；

3）加入適量抗生素；

4）混勻后按照平板大小倒入適量培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，接種細菌于37℃過夜培養(yǎng)。

2. X-Gal、IPTG加到瓊脂平板表面

1）于無菌超凈工作臺制備平板（如LB 瓊脂板）；

2）取40 μL 100 mM IPTG和120 μL 20 mg/mL X-gal混合，均勻地涂布于準備好的平板上；
    注：平板邊緣較難充分涂布均勻，容易產生假陽性，因此，為了得到更好結果，建議后續(xù)操作中盡可能在平板中間挑取單克隆。

3）37℃孵育直至所有液體被吸收（30 min或更長）。接種細菌于37℃過夜培養(yǎng)。

4、誘導原理：

首先：E.coli的乳糖操縱子（元）含Z、Y及A三個結構基因，分別編碼半乳糖苷酶、滲透酶和乙?；D移酶，此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調節(jié) 基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白，后者與O序列結合，使操縱子（元）受阻遏而處于關閉狀態(tài)。在啟動序列P上游還有一個分解（代謝）物基因激 活蛋白（CAP）結合位點。由P序列、O序列和CAP結合位點共同構成lac操縱子的調控區(qū)，三個酶的編碼基因即由同一調控區(qū)調節(jié)，實現(xiàn)基因產物的協(xié)調表達 。

其次：在沒有乳糖存在時，lac操縱子（元）處于阻遏狀態(tài)。此時，I序列在PI啟動序列操縱下表達的Lac阻遏蛋白與O序列結合，阻礙RNA聚合酶與P序列結合，抑制轉錄啟動。當有乳糖存在時，lac操縱子（元）即可被誘導。在這個操縱子（元）體系中，真正的誘導劑并非乳糖本身。乳糖進入細胞，經β-半乳糖苷酶催化，轉變?yōu)楫惾樘?。后者作為一種誘導劑分子結合阻遏蛋白，使蛋白構象變化，導致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉錄。異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的作用與異乳糖相同，是一 種作用極強的誘導劑，不被細菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實驗室廣泛應用。

注意事項：

1）運輸：冰袋運輸

2）保存：-20℃保存，有效期5年。

本產品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應用或其他用途。