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使用說明：

產(chǎn)品描述

伊文思藍(Evans Blue, CAS NO: 314-13-6) ,也稱作埃文斯藍，是一種非膜滲透性的染料。當質(zhì)膜受損，染料能進入細胞質(zhì)和細胞核，從而將其染成藍色，可用來檢測細胞活力。伊文思藍還能用來研究血腦屏障(BBB)滲透性，通過與白蛋白結(jié)合從而指示血腦屏障穿透蛋白能力。

推薦使用0.5%的伊文思藍染色液，使用很方便，直接加入樣本染色即可。

操作說明：

一.血腦屏障通透性

1.1 取處理后的動物(以小鼠為例) ,靜脈注射伊文思藍染色液(0.5%) ,使得小鼠眼睛、皮膚出現(xiàn)藍色。0.5~ 1h后處死小鼠，取出目的腦組織。 [注意] :伊文思藍染色液的注射用量需要根據(jù)動物類型以及體重來決定。

1.2 將腦組織置于1.5ml離心管中，加入1ml PBS， 迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿，4°C離心。

1.3 取上清，加入等量三氯乙酸，4°C孵育。該步驟亦可采用如下操作:取上清，按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮，室溫孵育24h。

1.4 4℃離心15min。

1.5 取上述溶液，用分光光度計測620 nm下的OD值。同時測定已知不同梯度的標準伊文思藍的OD值，繪制標準曲線。根據(jù)標準曲線計算出待測樣品的伊文思藍含量.

二、細胞活力鑒定

2.1取100μl重縣細胞到常規(guī)離心管內(nèi)，加入100μl伊文思藍染色液(0.5%) 輕輕混勻(染色時間可適當延長，但不宜超過10min)。

2.2吸取少量經(jīng)過染色后的細胞，用血細胞計數(shù)板計數(shù)。通常如果要比較精確地進行定量,每個細胞樣品至少數(shù)500個細胞，數(shù)出藍色細胞和細胞總數(shù)。細胞存活率計算公式如下:細胞存活率= (細胞總數(shù)-藍色細胞數(shù)) /細胞總數(shù)x100%

注意事項：

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。