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產(chǎn)品說明：

使用說明：

產(chǎn)品描述：

細(xì)胞膜熒光探針DiD，DiA，DiI，DiO，DiD和DiR染料是用于標(biāo)記細(xì)胞膜和其他疏水結(jié)構(gòu)的親脂熒光染料家族。當(dāng)摻入膜中或與親脂性生物分子如蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，這些對環(huán)境敏感的染料的熒光大大增強(qiáng)，盡管它們在水中是弱熒光的。它們具有高消光系數(shù)，極性依賴性熒光和短激發(fā)態(tài)壽命。一旦應(yīng)用于細(xì)胞，這些染料在細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)橫向擴(kuò)散，導(dǎo)致整個(gè)細(xì)胞在其最佳濃度下均勻染色。

DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和DiR（深紅色熒光）的獨(dú)特?zé)晒忸伾珵榛罴?xì)胞的多色成像和流式細(xì)胞分析提供了便利的工具。 DiO和DiI可分別與標(biāo)準(zhǔn)FITC和TRITC過濾器一起使用。其中DiD被633 nm He-Ne激光器激發(fā)，并且具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射波長，為標(biāo)記具有顯著內(nèi)在熒光的細(xì)胞和組織提供了有價(jià)值的替代方案。由于紅外光通過細(xì)胞和組織的有效傳輸以及紅外范圍內(nèi)的低水平自發(fā)熒光，DiR可用于體內(nèi)成像或示蹤。

本品為DiD的高氯酸鹽形式提供，純度≥95%，適用于熒光檢測研究。

使用步驟：

一、染液制備

1）制備DMSO或EtOH儲備溶液：儲備溶液應(yīng)在DMSO或EtOH中以1-5mM制備。
注意：儲備溶液的未使用部分應(yīng)儲存在-20℃。 避免反復(fù)凍/融循環(huán)。
2）準(zhǔn)備工作溶液：將儲備溶液（步驟1）稀釋到合適的緩沖液中，如無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS，制成1至5mM的工作溶液。
注意：對于不同的細(xì)胞類型和/或?qū)嶒?yàn)條件，應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定工作溶液的最終濃度。 建議在至少超過十倍范圍的濃度下進(jìn)行測試。

二、將細(xì)胞染成懸浮液：
1）在染料工作溶液中懸浮細(xì)胞密度為1×106 / mL（來自步驟1.2）。
2）在37°C孵育2-20分鐘。 最佳培養(yǎng)時(shí)間取決于細(xì)胞類型。 首先孵育20分鐘，然后根據(jù)需要進(jìn)行優(yōu)化以獲得均勻的標(biāo)記。
3）將標(biāo)記的懸浮管以1000至1500rpm離心5分鐘。
4）去除上清液，輕輕地將細(xì)胞重新懸浮在預(yù)熱（37°C）的生長培養(yǎng)基中。
5）按步驟3和4洗滌兩次。

三、染色貼壁細(xì)胞：
1）在無菌玻璃蓋玻片上培養(yǎng)貼壁細(xì)胞。
2）從生長培養(yǎng)基中取出蓋玻片，輕輕地排出多余的培養(yǎng)基。 將蓋玻片放在濕度箱中。
3）將100μL染料工作溶液（來自步驟1.2）吸移到蓋玻片的角落，輕輕攪拌直至所有細(xì)胞都被覆蓋。
4）將蓋玻片在37°C孵育2-20分鐘。 最佳培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)細(xì)胞類型而變化。開始孵育20分鐘，然后根據(jù)需要進(jìn)行優(yōu)化以獲得均勻的標(biāo)記。
5）排出染料工作溶液，用生長培養(yǎng)基清洗蓋玻片兩到三次。 對于每個(gè)洗滌循環(huán)，用預(yù)熱的生長培養(yǎng)基覆蓋細(xì)胞，孵育5-10分鐘，然后排出培養(yǎng)基。

四、顯微鏡檢測

1）DiD，DiO，DiI，DiS和DiR濾光器選擇參考下表

2）對于同時(shí)檢測多種染料，可提供如下多波段濾波器組：
a）DiI和DiO = Omega XF52，Chroma 51004
b）DiI和DiD = Omega XF92，Chroma 51007
c）DiI，DiO和DiD = Omega XF93，Chroma 61005

5. 流式細(xì)胞儀檢測：
用DiO，DiI，DiD，DiS和DiR標(biāo)記的細(xì)胞可分別使用常規(guī)FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測通道進(jìn)行分析。

注意事項(xiàng)：

為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并帶一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。