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產(chǎn)品說(shuō)明：

產(chǎn)品描述

溶核糖核酸酶A（Ribonuclease A，常用縮寫(xiě)RNase A），一種含4個(gè)二硫鍵的單鏈多肽，分子量約為13.7 kDa（氨基酸序列）。作為一種核糖核酸內(nèi)切酶（endoribonuclease），特異性降解單鏈RNA上的胞嘧啶（C）或尿嘧啶（U）殘基。具體來(lái)說(shuō)，切割識(shí)別的是由某核苷酸上的5’-核糖和相鄰的嘧啶類(lèi)核苷酸3’-核糖上磷酸基團(tuán)形成的磷酸二酯鍵，從而使得2’, 3’-環(huán)磷酸水解為對(duì)應(yīng)的3’-核苷磷酸（比如，pG-pG-pC-pA-pG經(jīng)RNase A切割產(chǎn)生pG-pG-pCp 和A-PG）。RNase A切割單鏈RNA活性最高，推薦工作濃度為1-100 μg/mL，兼容于各種反應(yīng)體系。低鹽濃度（0-100 mM NaCl），可用來(lái)切割單鏈RNA，雙鏈RNA，以及RNA-DNA雜交形成的RNA鏈。然而，高鹽濃度（≥0.3 M），RNase A僅特異性切割單鏈RNA。

核糖核酸酶A（RNase A）最常見(jiàn)的應(yīng)用在于質(zhì)粒DNA或基因組DNA制備過(guò)程中去除RNA，此制備過(guò)程中DNase酶活性的存在與否是需要重視的污染之一，可采用水浴煮沸這種傳統(tǒng)方法來(lái)滅活DNase活性。另外，本品還可用于RNA酶保護(hù)分析、RNA序列分析等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

儲(chǔ)存液制備

注意：此為RNase A儲(chǔ)存液配制的常用方法之一，也可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)的方法，或者參考文獻(xiàn)資料使用其他方法制備儲(chǔ)存液（如直接溶于10 mM Tris-Cl, pH7.5或者Tris-NaCl溶液）。

1）利用10 mM的醋酸鈉（pH5.2）制備10 mg/mL 的RNase A 儲(chǔ)存液；

2）100℃加熱15 min；

3）冷卻到室溫，加入1/10體積的1 M Tris-HCl（pH7.4），調(diào)其pH至7.4（如：5 mL 10 mg/mL的RNase 儲(chǔ)存液加入500 μL 1 M Tris-HCl, pH7.4）；

4）分裝于-20℃凍存，可穩(wěn)定保存長(zhǎng)達(dá)2年。

注意：在中性條件下煮沸RNase A溶液，會(huì)有RNase沉淀形成；在更低的pH下將其煮沸，如有沉淀可以觀察到，可能由于蛋白雜質(zhì)存在造成。煮沸之后若發(fā)現(xiàn)沉淀，可通過(guò)高速離心（13,000 rpm）去除雜質(zhì)，然后分裝凍存。

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注意事項(xiàng)：

1）RNase A會(huì)強(qiáng)吸附在玻璃器皿上，建議溶液裝到塑料離心管內(nèi)。

2）對(duì)于同時(shí)操作完整RNA實(shí)驗(yàn)的研究人員，一定要謹(jǐn)防RNase A引入干擾試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。