訂購(gòu)信息：

產(chǎn)品說明：

使用說明：

基本描述:

CFDA，SE是一種穩(wěn)定的、細(xì)胞膜滲透性的非熒光染料，由兩個(gè)醋酸基團(tuán)和一個(gè)琥珀酰亞胺酯(SE) 官能團(tuán)組成的一個(gè)熒光分子。一旦主動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞，其醋酸基團(tuán)被胞內(nèi)酯酶切割，生成熒光素酯CFSE。CFSE具有高度熒光，且能通過其琥珀酰亞胺酯基團(tuán)共價(jià)結(jié)合到細(xì)胞內(nèi)的蛋白氨基基團(tuán)。正是這個(gè)共價(jià)偶聯(lián)反應(yīng)，CFSE能夠極其長(zhǎng)期的保留在細(xì)胞內(nèi)，長(zhǎng)達(dá)數(shù)個(gè)月。

另外，歸因于這一穩(wěn)定連接,一旦染料進(jìn)入細(xì)胞， 不會(huì)轉(zhuǎn)移到鄰近細(xì)胞。無活力細(xì)胞仍然是非熒光。而活細(xì)胞一旦分化，CFSE能夠很均勻的分散到子細(xì)胞中，每分裂一次子代細(xì)胞約能得到親本細(xì)胞1/2的熒光強(qiáng)度，因此，通過流式細(xì)胞儀對(duì)熒光強(qiáng)度的檢測(cè)，能夠依次分選出未分裂細(xì)胞，分裂一次的細(xì)胞(1/2熒光強(qiáng)度)，分裂兩次的細(xì)胞(1/4熒光強(qiáng)度)，分裂三次的細(xì)胞(1/8熒光強(qiáng)度) , 以及以此類推其他分裂次數(shù)的細(xì)胞。CFSE可以檢測(cè)分裂多達(dá)8次或更多次數(shù)的細(xì)胞增殖。

使用方法
一.  儲(chǔ)存液制備

將低溫保存的凍干粉產(chǎn)品置于室溫回溫至少20min,之后短暫低速離心，讓所有粉末都掉落至管底。稱取適量粉末用高質(zhì)量無水DMSO溶解配制10mM儲(chǔ)存液。比如5mg CFDA, SE (Mw: 557.46)用897μl DMSO充分溶解即得到10mM儲(chǔ)存液。根據(jù)單次用量分裝，置于≤-20°C避光干燥保存， 避免反復(fù)凍融。儲(chǔ)存液最好是一個(gè)月內(nèi)用完，最多不超過三個(gè)月。

二.工作液制備

于正式實(shí)驗(yàn)前，用HHBS緩沖液或其他生理緩沖液(pH 7.0)稀釋儲(chǔ)存液到1-10μM工作濃度，渦旋混勻。

[注意事項(xiàng)] :

1 CFDA, SE是胺反應(yīng)性。CFDA, SE標(biāo)記步驟不可使用含首胺的緩沖液，比如，HHBS或PBS是推薦的CFDA, SE稀釋緩沖液。

2 CFDA, SE的染色濃度需要根據(jù)使用的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩磉M(jìn)行優(yōu)化調(diào)整。比如，如果用于細(xì)胞增殖的熒光逐漸稀釋分析,相對(duì)高濃度的CFDA, SE染色工作液比較理想；如果僅是用來標(biāo)記細(xì)胞用作另外一種熒光標(biāo)志探針的復(fù)染劑，相對(duì)低濃度的CFDA, SE染色工作液比較理想，能夠良好的防止不同濾片設(shè)置間的熒光溢出。

三. 染色步驟

3.1室溫300 xg離心細(xì)胞5min,吸掉上清。

3.2用預(yù)熱的無菌HHBS. PBS或其他生理緩沖液清洗細(xì)胞以去除任何殘留的血清蛋白。之后同上離心細(xì)胞，吸掉上清。

3.3用上述配制好的CFDA, SE染色工作液重新懸浮細(xì)胞，制備成1-3 x 107cells/mL的單細(xì)胞懸液。

3.4室溫或37℃避光孵育15~ 30min。中間可偶爾的輕輕顛倒混勻使得細(xì)胞均勻接觸到染料。

3.5加入5倍原始染色體積的細(xì)胞培養(yǎng)液(含10% FBS)來淬滅染色過程，輕輕顛倒幾次混勻。

3.6室溫300 xg離心細(xì)胞5min,吸掉上清。再用10ml完全細(xì)胞培養(yǎng)液清洗細(xì)胞一次。

3.7再用10ml完全細(xì)胞培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，37℃解育5min, 以促進(jìn)CFDA, SE在細(xì)胞內(nèi)的充分反應(yīng)和未反應(yīng)的CFDA, SE重新回到完全細(xì)胞培養(yǎng)液中。離心去上清，完成最后一次清洗。

3.8之后用完全細(xì)胞液重懸細(xì)胞，此時(shí)可用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀來觀察標(biāo)記效果?；蜷_始用藥物刺激處理或繼續(xù)常規(guī)培養(yǎng)。經(jīng)適當(dāng)時(shí)間后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖，或用于特定目的的細(xì)胞示蹤。標(biāo)記細(xì)胞也可用于活體動(dòng)物的移植，并用熒光進(jìn)行示蹤。

注意事項(xiàng)：

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。